KAPA Library Preparation

Das KAPA Library Preparation Kit enthält alle Enzyme und Reaktionspuffer, die für die Konstruktion von Illumina-Bibliotheken aus fragmentierter dsDNA benötigt werden. Dabei werden die Puffer mit allen für die Reaktion erforderlichen Komponenten außer Oligonukleotid-Adaptern bzw. PCR-Primern geliefert. Ebenso wird für jeden Schritt der Bibliotheksherstellung ein Enzym-Mix zur Verfügung gestellt, so dass nur wenige Pipettierschritte  erforderlich sind.

Das KAPA Library Preparation Kit umfasst die folgenden Module:

End Repair:  Das 'End Repair'-Modul für die Herstellung von DNA-Fragmenten mit stumpfen Enden und 5’-Phosphorylierung enthält einen Enzym-Mix (T4 DNA-Polymerase und T4 Polynukleotidkinase) und eine Puffer mit dNTPs.

A-Tailing: Das 'A Tailing'-Modul fügt dAMP an die 3'-Enden der dsDNA-Fragmente. Es enthält das Klenow-Fragment und einen Puffer.

Adaptor Ligation: Das 'Adaptor Ligation'-Modul legiert dsDNA-Adapter mit 3'dTMP-Überhang an die Fragmente der Bibliothek. Es enthält eine DNA-Ligase und einen Ligationspuffer.

Library Amplification: Das 'Library Amplification'-Modul verwendet eine 'Proofreading'-Polymerase, um die Fragmente der Bibliothek, die über die passenden Adaptersequenzen verfügen, vor der Sequenzierung zu amplifizieren. Das KAPA Library Preparation Kit wird entweder mit einem Modul für die Endpunkt-PCR oder die 'Real Time'-PCR geliefert. Das Modul für die Endpunkt-PCR enthält den KAPAHiFi Library Amp ReadyMix. Das Modul für die 'Real Time'-PCR enthält KAPAHiFi Library Amp Real-Time mit SYBR Green I und vier Fluoreszenz-Referenzstandards, die bestimmte DNA-Konzentrationen repräsentieren.

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